Buenas prácticas de dilución

Objetivo

Establecer un método consistente para calcular y ejecutar diluciones seriadas, minimizando el error acumulado entre pasos sucesivos.

Materiales

• Solución madre reconstituida y su concentración confirmada
• Diluyente definido por el protocolo experimental
• Micropipetas calibradas de volumen variable
• Tubos de dilución rotulados
• Hoja de cálculo para verificación matemática previa

Procedimiento

1. Calcular la serie completa antes de pipetear. Definir en la hoja de cálculo todas las concentraciones objetivo de la serie antes de tocar una pipeta, evitando decisiones improvisadas a media dilución.
2. Verificar el factor de dilución elegido. Confirmar que el factor de dilución seleccionado no exija volúmenes por debajo del límite de precisión confiable de la micropipeta disponible.
3. Rotular cada tubo antes de dispensar. Etiquetar todos los tubos de la serie con su concentración objetivo antes de agregar líquido, para evitar confusiones bajo presión de tiempo.
4. Ejecutar la dilución en orden descendente. Partir siempre de la concentración más alta hacia la más baja, usando una punta de pipeta nueva en cada transferencia para evitar arrastre.
5. Homogeneizar cada paso antes de continuar. Mezclar completamente cada tubo antes de tomar la alícuota para el siguiente paso de la serie; una mezcla incompleta se propaga como error a todos los pasos posteriores.
6. Verificar contra un punto de control. Cuando el diseño experimental lo permita, incluir un punto de control independiente que permita detectar un error sistemático en la serie completa.

Criterios de verificación

• La hoja de cálculo con la serie completa se guardó junto con los resultados del ensayo
• Cada tubo de la serie está rotulado de forma inequívoca antes de su uso
• Se utilizó una punta de pipeta nueva en cada transferencia de la serie
• El punto de control, si existe, corresponde con el valor esperado dentro del margen definido